别出心裁 特别好用的蛋白分子量标准[选购宝典]

【字体: 时间:2005年09月01日 来源:生物通

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前面已经介绍了3类不同用途的蛋白分子量标准,这里还要特别推荐2个好东东,特别好。 

①“五星级”蛋白标准:MagicMark Western

Invitrogen公司的这一款专门为Western印迹设计的蛋白Marker正如它的名字一样,给使用者带来一种奇妙的感觉:分子量估算精确无误,直接可见、无任何附加步骤和额外的试剂、与目的蛋白同在一张膜上、保持时间长——总而言之,它的诞生可以说是蛋白分子量标准中的新经典。

 

我们前面说过,蛋白质分子量标准条带越多越好,分布越均匀,参考价值越高。MagicMark蛋白标准的8条带分别是20KD, 30KD, 40KD, 50KD, 60KD, 80KD, 100KD, 120KD,分布得非常均匀,就象Ladder一样,秘诀在于每一个蛋白条带都是在E.coli中的重组蛋白,分子量的区别是通过某一段序列的重复来实现的,更巧妙的是这段重复序列是G蛋白上的IgG结合序列部分——G蛋白高度亲和IgG,所以,这个Marker的每一条带都可以结合一抗的IgG,间接或者直接结合二抗的IgG,跟随着Western印迹一步步的完成,MagicMark上的蛋白也随之完成显示,而且是和目的蛋白同时同地显示,与目的蛋白保持同样长的时间,总而言之,就是“紧紧跟随党的脚步”。这个设计实在巧妙,令人拍案!利用融合在MarkerProtein G特异结合IgG,实现了Marker条带和目标蛋白同时结合抗体,从而实现不需要另外添加任何外源试剂,就可以直接标记在Western Blot结果上——既不需要像未染蛋白标准那样需要剪下来额外染色,也不会像预染蛋白标准那样容易褪色消失和不那么精确,更不会像生物素标记的蛋白标准那样操作繁琐以及条带模糊,或者因为加入额外的试剂而导致假阳性的可能。由于没有标记偶联其他分子,MagicMark显示的是精确真实的分子量大小,加上是Ecoli表达产物,可以高度纯化使得条带非常锐利清晰。所以,MagicMark蛋白标准确实是做到了省时省心,但至于省钱呢,MagicMark250ul包装需要2953人民币,上样时每孔加入2-10ul,即每次WB(一个Marker23.6元—118元,真是好东西不便宜,不过Invitrogen公司产品定位就是这样,我们也没办法。还是要承认,设计构思的巧妙和使用结果实在太赞了。

 

另外,MagicMark还是有少少缺点,就是蛋白条带范围还不够广——仅20-120kD 8个蛋白条带,当然这对于一般需要是能够满足了,但如果能将范围扩大到小肽和大分子蛋白的区域,那么就能有更多的实验室人员享受到MagicMark“五星级”的待遇了。现在Invitrogen公司也注意到了这一点,推出了MagicMark XP(不知道是不是和Windows XP一个意思),在原来的8条带基础上增加一个220KD的条带,从而将蛋白条带范围扩大到了20-220kD,为高分子量需求的实验人员提供新的选择。另外还要特别注意的是,我们知道ProteinG对不同来源的IgG的亲和性有一定区别,所以MagicMark对来源于人,马,牛,兔和猪的IgG亲和性很高——也就是说少量Marker就可以很好的显色了;与来源于大鼠,小鼠,豚鼠,山羊,绵羊,爪蟾的IgG结合能力一般,OK,但与来源于鸡的IgG结合能力较差——如果你正好做这个,让我同情你一下,你每次要多用好多Marker了,花钱如流水了,哈哈。不过如果一抗和二抗中有一个亲和力高应该也有助于解决这个问题。还有就是如果是IgM抗体恐怕是有问题的。

 

 

②“中西合璧”蛋白标准:Trail Mix™ Western Markers & Blot Kits

有时候当我们用到未染蛋白标准来转膜时,就会想:如果能够在转膜过程中看到条带该多好。之后,预染蛋白标准出现了,但是当我们用预染蛋白标准时,又会觉得:嗯,这种蛋白标准不够精确,不够“标准”嘛。就像生病时,我们拿不准是信西医还是中医一样。如果能够中西合璧,一种Marker包含两种蛋白标准就好啦。

 

默克公司旗下的Novagen推出的Trail Mix™ Western Markers & Blot Kits就取了这个巧:这种蛋白分子量标准包括了NovagenPerfect Protein Western Markers和另外三种预染蛋白——PerfectLadder225,150,100,75,50,35,25,15kD,三种预染蛋白分子量大小为15(红色), 16(蓝色)和100kD(红色)(这样的条带分布比较合理,因为这里预染蛋白并没有起到标定的作用,只是作为指示)。

 

而且Trail Mix得到的效果是1+12的,因为其中的Perfect Protein上的蛋白带有S-tagHis-tag的融合多肽,可以在Western Blotting过程中跟随着目的蛋白一起通过二抗显色,试剂盒里就有S-protein AP or HRP Conjugate,方便最后显色。

 

再来看看这个产品的价格定位:一个试剂盒能用25次,定价为852人民币,也就是说,一次需要大约34元,比起一些高过百元的Marker还不算贵,可以接受,你说呢?(生物通作者张迪)

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