胶回收之选全攻略(4)[选购宝典]

【字体: 时间:2006年07月17日 来源:生物通

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胶回收方法之选全攻略

胶回收方法全攻略(2)

胶回收方法全攻略(3)

2.MinElute Gel Extraction Kit

品牌:Qiagen
回收范围:70bp-4kb
推荐指数:
价格指数:(50包装1,485,约29元/反应,现生物通有半价活动哦)

特点:

  • 洗涤体积只要10ul,回收产物浓度高,方便后继实验
  • 使用方便快捷(wash-and-spin)
  • 高回收率
  • 回收产物纯度高,可用于同位素或荧光测序、芯片分析、连接转化、酶切、标记、PCR、显微注射、体外转录等后继实验

使用心得:

    如果要回收片断量本来就很少,比如只有几十个ng,用常规的试剂盒洗脱得到将近50ul的产物,连接反应就很难做——要不体积很大,要不会觉得浓度太低。如果是用来做显微注射、标记等实验就更难受,只能再浓缩一次,不但麻烦,多一次操作也会导致产物进一步的损耗。这一点,就是快速的柱回收试剂盒比传统方法不如的地方,因为传统方法得到沉淀后可以按照需要溶解得到自己需要的浓度,柱回收就不行。MinElute就是为这个需要而诞生的。MinElute胶回收试剂盒是基于一种特殊的Silica gel menbrane的膜技术,能在高盐浓度的条件下迅速吸附DNA,在低盐或者纯水条件下释放DNA,只要短短几分钟,就能彻底除去包括引物、核苷酸、酶、矿物油、盐、琼脂糖、EB以及其它杂质,和以前QIAGEN的Silica gel menbrane有所不同的是,它要求的洗脱体积非常小,只要10ul(当然这更要注意让洗脱液加在膜上),纯化的DNA是高度浓缩的,回收率在80%以上。这样就非常适合用于后继实验操作,不需要再浓缩一次。

    MinElute为了确保高质量和高回收率,利用了特殊的binding buffer,这种缓冲液是特别设计和优化了的,可以增加DNA分子特异性吸收,减少杂质,不过也带来了一个问题,那就是导致MinElute的DNA吸附范围是70bp到4kb,而不是以往的10kb,因此4kb以上的只能用Qiagen的Qiaquick或其它产品了,而10kb以上就该用QIAEX II系列。此外MinElute柱子的载量是5ug,毕竟洗脱体积这么小。

    体积小则小矣,可是质量并不含糊,回收的产物可以用于PCR、克隆、标记、测序、体外转录等后继实验,也同样可以用于显微注射、芯片分析等要求非常严格的实验。你尽管可以说,我又不需要做那些严格实验,我就克隆PCR什么的就够了,哪儿要那么纯——然而你也不能否认这本来就是一种质量可靠的信心保证。特别是当遇到特价活动的时候,你还犹豫什么呢。

    除了以上几个方面,MinElute系列产品正如Qiagen其它产品一样:讲究精确完美,注重细节品质。MinElute有三种上样Buffer染料颜色(青、蓝和黄),方便样品分析,并且也包含pH目测指示染料,可以在溶胶的时候帮助指示实验错误(pH值对胶回收影响较大,见下)——错误的颜色代表了凝胶Buffer重复使用等实验配置不当导致的不正确化合物,这种情况可通过醋酸钠进行调整。(转下页)

  ·胶回收之选全攻略(5) 
  ·胶回收之选全攻略(6:大片断的难题)
  ·胶回收之选全攻略(7)

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