生物通编者按：2007年结束在即，各种年终汇总琳琅满目，生物通网站也将于未来一个多月里大摆生物技术饕餮盛宴，为读者带来前沿技术和最新信息的思维享受和满足——每日密集精选各厂家及经销商过去一年在中国大陆地区着力推广的重点产品文章或者最新上市的新产品新技术文章，将2007年当中生物通网站倍受瞩目的产品和技术一一呈递，打造精彩纷呈的生物技术产品“视觉盛宴”：“头盘”蛋白技术篇、“汤菜”芯片服务篇章、“副菜”细胞技术篇、“主菜”仪器篇、“甜品”PCR技术篇及分子生物学篇等。品赏饕餮盛宴的每道精品之后，即将根据读者投票，公布“精彩生物通2007中国年度产品大奖”评选结果。

生物通技术盛宴7:蛋白样品浓缩沉淀法宝

生物技术盛宴6：蛋白纯化层析柱

2007技术盛宴5:蛋白样品制备中各类杂质/杂蛋白的去除

生物通技术盛宴4：蛋白酶抑制剂的选择

生物通技术盛宴3：磷酸化蛋白和糖基化蛋白的样本制备

生物通技术盛宴2：蛋白样本制备产品大PK

蛋白技术篇之蛋白样品制备

一、“头盘”蛋白技术篇

1. 蛋白技术篇之蛋白样品制备

开篇之际，首先来看看这两句话：
“在制备中丢失的蛋白是永远不可能在后面的实验中弥补回来的”，
“让我们把蛋白质看作是具有独特而奇妙性质的实体”。

蛋白样品制备是许多实验重要的第一步，蛋白样品由于其结构特性各异，又必须使其完全溶解和尽可能少的化学修饰，所以不可能有一个通用的技术，只能通过大量的实验来积累经验。正如开篇所引用的两句话中包含的深意：在研究蛋白的过程中，既需要严谨的技术流程，规范的操作手段来确保蛋白研究的完整性，也需要将其看成是独特而奇妙的个体，结合以往经验但又不拘泥于经验，才能真正揭开她神秘的面纱。2007年年底让我们一起来回顾一下这一重要技术及值得关注的产品。

为什么要进行样品制备

“为什么要进行样品制备？电泳的目的不就是分离吗？”刚接触双向电泳的小菜鸟有可能就会这么问。这个问题很好回答，这是由于目前双向电泳一般只能分辨到1000-3000个蛋白质点(spot)，而样品中的蛋白种类可达到10万种以上，因此样品的预分离制备是必须的。另外比如像对临床组织样本进行研究，寻找疾病标记的蛋白质组学研究目的，由于临床样本都是各种细胞或组织混杂，而且状态不一，如肿瘤组织中，发生癌变的往往是上皮类细胞，而这类细胞在肿瘤中总是与血管、基质细胞等混杂。所以常规采用的癌和癌旁组织或肿瘤与正常组织进行差异比较，实际上是多种细胞甚至组织蛋白质组混合物的比较，而蛋白质组研究的通常是单一的细胞类型，因此需要进行有效的样品制备。

但是为什么要进行不同步骤的样品制备呢？这不仅仅是由于蛋白本身不同，所以需要不同方法来配合，而且在制备样品的时候，首先需要明确的是什么是实验的最终目的：是分离尽可能多的蛋白还是分离样品中某些感兴趣的蛋白，这些直接决定了你的制备方法，也决定了实验的成功与否。由于想要分离的蛋白必须是完全溶解的，溶解的效果取决于裂解、破碎、沉淀、溶解的过程以及去污剂的选择和各种溶液的组成，因此如果是只对样品中的一部分蛋白感兴趣，可采取预分离的方法，如欲分析的蛋白来自细胞器（细胞核、线粒体和原生质膜），则应先采取超速离心或其他方法将细胞器分离出来再溶解蛋白；如果是希望分离出尽可能多的蛋白，比如进行全蛋白质组分析，则可以将细胞或组织中的蛋白分成几部分，分级制备。

ebiotips:样品制备的原则：

1. 应使所有待分析的蛋白样品全部处于溶解状态（包括多数疏水性蛋白），且制备方法应具有可重现性。

2. 防止样品在聚焦时发生蛋白的聚集和沉淀。

3. 防止在样品制备过程中发生样品的抽提后化学修饰（如酶性或化学性降解等）。

4. 完全去除样品中的核酸和某些干扰蛋白。

5. 尽量去除起干扰作用的高丰度或无关蛋白，从而保证待研究蛋白的可检测性。

以上这五项原则是根据北大人类疾病研究中心讲座内容改编而来，基本上可以说是囊括了样品制备过程中的抽象注意事项，之后还会提到具体的注意事项。

上一页 [1] [2] [3] 下一页