本文探讨了应用新型高保真基因编辑系统Cas-CLOVER,在悬浮适应型CHO-K1细胞中顺序敲除位于染色体5(GS5)和染色体1(GS1)的内源性谷氨酰胺合成酶(GS)基因,成功构建了双敲除(GS-DKO)宿主细胞平台(命名为CleanCut GS)。研究通过与CRISPR/Cas9对比,验证了Cas-CLOVER在GS5与GS1位点更高的编辑效率(84% vs. 57.4%;74% vs. 62%)及在40个预测脱靶位点均未检测到脱靶突变。该平台结合专有的Harbor-IN转座子系统稳定表达曲妥珠单抗后,在24深孔板补料分批培养14天后,细胞特异性生产力(Qp)超过100 pg/细胞/天,抗体滴度大于5 g/L,且产量稳定性可维持超过60代。本研究为生物制药工业提供了具有高生产效率、低脱靶风险的CHO细胞系开发新工具和新平台。